草莓组织培养？

组织培养技术 1．培养程序和培养基 5--6月于晴天的下午在健壮、无病的草莓刚抽出的匍匐茎上取茎尖，大小为0．3--0．4mm，作为组织培养的外植体。

用于草莓茎尖培养诱导芽分化的基本培养基为MS，附加6--BA0．5mg/L，NAA0．2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂粉6．5g／L，pH值调至5．8--6．0。在草莓茎尖的扩大繁殖阶段，采用MS培养基附加6-BA0．5mg/L、NAA0．01mg/L。扩大繁殖主要是将丛生苗分块即每5--7株切成一块，转入继代培养基。在转苗过程中，去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中随时清除愈伤组织，有利于新苗增殖和生长。诱导生根培养基用1／2MS附加不同浓度IBA。试验表明：以IBA0．1mg/L的浓度处理的生根率最高，为100％，平均根条数为2．4条。不加IBA及IBA浓度超过0．2mg/L，多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织，随后在愈伤组织上分化生根，致使成活率大大降低。2．操作技术要点及培养条件 (1)灭菌与接种 预处理 为了灭菌彻底，常把接种材料先进行湿润处理，使灭菌剂能顺利地渗入材料。可用多种湿润剂，我们采用的是75％的酒精，湿润的时间为半分钟至1分钟。灭菌处理 在草莓组织培养中常用灭菌剂的种类很多。我们曾用过次氯酸钠10％水溶液(含有效氯0．4--0．5％)，浸泡接种材料10--15分钟；次氯酸钙(漂白粉)，用其饱和上清液，浸泡接种材料15--30分钟；过氧化氢10--12％水溶液浸泡10--20分钟；新洁尔灭5--10％水溶液，浸泡10--15分钟；升汞0．1％水溶液，浸泡8--10分钟。其中前4种灭菌剂对接种材料比较安全，但因灭菌时间较长，常常使接种材料的外层氧化变褐，以致影响培养效果。升汞有很强的杀菌能力，但浸泡时间稍长会造成接种材料中毒。因此，在草莓组织培养中，如把握好时间，升汞是应用较多的灭菌剂。灭菌后的接种材料，要用无菌水充分清洗，通常要换水3--5次。接种 以培养无病毒苗为主要目的的草莓组织培养，所接种的茎尖材料很小，在接种时首先要求准确熟练地剥取茎尖生长点，并使用固体培养基比较适宜，接种时应注意不能将整个茎尖埋入培养基中。培养基须用1--1．1大气压热压灭菌20分钟。从材料接种到生根苗长成，这期间的培养温度一般应稳定在25±2℃。每日光照12小时，光强发2000Lx为宜。培养室温度在18--26℃范围内，瓶苗可以正常生长及发根，但在28℃以上时，绿苗普遍变黄，生根率降低，根尖发黄老化，幼苗易产生玻璃化现象。组培苗的移栽技术 1．移栽技术 试管苗的苗龄为15天，主根长1．5cm左右，白色无须根，移栽成活率可达90％--100％。移栽前要将培养瓶从培养室中取出置于自然条件下，打开瓶盖进行透气锻炼。24小时后，从瓶中取出幼苗，清除干净根部及根颈处的培养基，栽入苗圃或穴盘中进行驯化。基质可采用经过灭菌处理的腐熟的锯木屑或腐叶土，也可采用经过灭菌处理的由蛭石与珍珠岩按体积计以1：1比例配成的混合物，或园土与煤渣按体积计以2：1比例配制成的混合物。2．提高移栽成活率的关键 选择不定根直接生自茎基，根多且粗壮，叶片在3片以上，叶大、厚、深绿的生根苗，成活率普遍较高。栽培基质要用清水冲洗干净，或用多菌灵或甲基托布津掺拌灭菌，用煤渣作基质时，还要用0．2％冰乙酸中和使碱性降低。移栽时采取“深栽浅埋”。深栽就是在移栽时根要栽得深，浅埋的标准是使小苗的根颈与土表平齐，或略高于土表。注意控制光照与温度、湿度。小苗移栽后，放在温室内或塑料拱棚内培养，温度控制在15--20℃，湿度维持在80％左右为宜。同时由于刚移栽的小苗茎杆脆嫩，应尽量采用喷雾状浇水，水量也不宜过大，落干后再喷。遮光50％，一周后，可逐渐增强日光照射。