考研题 微生物 请高人帮忙 先谢了 有一段已知序列的小分子抗菌肽，论述如何采用生物工程的技术进行表达?

一、考研题 微生物 请高人帮忙 先谢了 有一段已知序列的小分子抗菌肽，论述如何采用生物工程的技术进行表达?

这是一道论述题，我自己按照我的理解给你回答一下吧，希望能够给你一些帮助

首先要知道抗菌肽的表达系统是真核的还是原核的，答题的思路是：

1、利用genbank搜索已知序列，如果没有则需要自行测序

2、分别测出N端和C端个15个氨基酸序列，利用密码子简并性和偏爱性设计引物

3、引物设计出来以后抽提总RNA，用RT-PCR对抗菌肽对应的基因进行扩增。

4、测序，将目的基因连接到T载体上，转化入克隆菌（如TG1），蓝白斑筛选，用PCR和酶切鉴定重组结果，获得重组质粒后，以此为模板进行测序，验证目的基因的准确性。

5、选择适合的表达系统和适合的载体。可采用大肠杆菌原核表达系统，将目的基因从与T载体的重组质粒上进行双酶切后连接到适合的载体（如pET28a）上，转化入克隆菌（如TG1）并大量克隆，用酶切和PCR鉴定重组结果。也可采用真核表达系统，若改小分子抗菌肽是真核表达的蛋白，易糖基化、易翻译后修饰，则用原核表达系统难以表达天然产物结构功能相似的蛋白。故采用真核表达系统。通过位点特异的转座可方便地将外源基因插入到病毒穿梭载体上，然后提取含有外源基因的重组DNA，将其转染昆虫细胞即可获得含有外源基因的重组病毒用于表达目的蛋白。

6、产物的表达、分离和纯化。原核表达系统，是将重组质粒转化到合适的大肠杆菌表达菌（如BL21、BL21*等）中，加IPTG诱导剂进行诱导表达，经SDS-PAGE电泳鉴定表达产物后，通过超声诱导菌，将上清和沉淀分别进行SDS-PAGE电泳，确定蛋白是上清蛋白还是包涵体，之后根据蛋白表达的方式可采取相应的方法进行目的蛋白的分离和纯化。也可利用含有外源基因的家蚕杆状病毒感染家蚕幼虫或蛹进行真核表达，表达的蛋白具有天然活性。

7、确定活性一致。使用免疫学手段，给成年新西兰兔多次皮下注射乳化好的纯化后蛋白，获得相应抗体，用Western blot和Elisa的方法，目的蛋白和抗体会发生特异性结合，并用Elisa检测抗体的效价，以此确定活性一致。

以上纯手打，希望能给你一些帮助。

二、选择专业与就业

面对现实，不说大道理,自己的前途，自己来把握

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当我们追求理想时，当然不能忽略了实际问题。 最完美的是能将理想和实际相结合，

找一份你最爱的工作。 当理想和实际有分歧时，你要分三步走。

1）面对现实，只要能得温饱，有了一定的收入，你能从中得到物质的享受

2) 从实际出发，做你不是最喜爱的工作。把不爱做的工作做得“足够好”，然后再说去追逐什么理想。

3）逐步实现理想，做你不是最爱的工作，而在你不爱的工作上拚命，

赚够了钱，解决了吃饭的问题，再去做你最爱的工作。 。。。

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理想与实际是可以兼得的。但是你必须有计划，必须付出，必须执著。

 三百六十行，行行出状元，所以不能说什么工作好什么工作不好。

许多做出成就的人其实都是从小事做起，兢兢业业，然后才取得成功的。

一个工作只要你喜欢，而且这个工作又特别适合你，能最大限度地发挥你的长处，

那么，这就是个好工作。我不太赞成找不到工作就不就业的做法。在就业的同时能实现择业当然好，

但是，在就业形势比较严峻的形势下，很难在就业的同时实现择业。

在这种情况下，先就业后择业未必就不是一件好事，在这个过程中你会发现自己积累了好多社会经验，

积累了许多职业技能，而现在企业越来越看中经验。所以先积累经验，

这也有助于你以后找到更为理想的工作。 打工,实践,积蓄,有一定条件后自己发展。

应该说哪一行都不好做，只要努力哪一行都能做好！

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祝你成功！

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三、大连理工怎么样啊？有什么强势学科

校科研工作具有较强实力，有 1 个国家干部培训基地（中国大连高级经理学院）， 4 个国家重点实验室（海岸及近海工程国家重点实验室、三束材料改性国家重点实验室、精细化工国家重点实验室、工业装备结构分析国家重点实验室）， 1 个国家工程研究中心（船舶制造国家工程研究中心）， 1 个国家大学科技园（大连理工大学 -- 七贤岭国家大学科技园）， 1 个国家级技术转移中心（大连理工大学技术转移中心）， 1 个国家级技术中心（国家振动与强度测试中心）， 2 个教育部重点实验室（精密与特种加工实验室、工业生态与环境工程）， 5 个省级重点实验室（辽宁省微纳米技术及系统重点实验室、辽宁省内燃机重点实验室、辽宁省工业设备先进控制系统重点实验室、辽宁省生物基化学品重点实验室、制造管理信息化重点实验室）， 3 个教育部工程（技术）研究中心（教育部模塑制品工程研究中心、教育部制造管理技术工程研究中心、教育部动物性食品安全保障技术工程研究中心）， 6 个辽宁省工程（技术）研究中心（辽宁省精细化工工程研究中心、辽宁省先进装备设计与 CAE 软件工程研究中心、辽宁省电子政务工程研究中心、辽宁省先进船舶技术工程技术研究中心、辽宁省高性能树脂工程技术研究中心、辽宁省工业生态与环境工程技术研究中心），7个国家级企业技术中心大连理工大学分中心， 2 个国家培训中心（中国微电子技术应用开发培训中心、大连 ITU互联网培训中心）， 3 个国家级教育、教学基地（国家工科化学教学基地、国家大学生文化素质教育基地、国家集成电路人才培养基地）， 2 个国家级实验教学示范中心（基础化学实验中心、工程训练中心），7个省级实验教学示范中心（基础化学实验中心、基础物理实验中心、电工电子实验中心、工程训练中心、生物与环境实验中心、信息技术实验中心、水利学实验中心）， 6 个辽宁省示范性专业， 4 个辽宁省骨干教师培训基地， 2 个研究基地（辽宁省“三个代表”重要思想研究基地、辽宁省高校“科技伦理与科技管理”研究基地）， 13 个省级高校重点实验室， 3 个省级高校工程研究中心（先进船舶工程技术研究中心、先进装备设计与 CAE 软件工程研究中心、工业生态与环境工程技术研究中心）， 2 个大连市社会科学重点研究基地， 3 个市级研发机构， 2 个校企合作研究院（沈鼔－大工研究院、辽油－大工研究院）， 4 个世界银行贷款、高等教育发展项目建设的教学实验中心（工程训练中心、基础物理实验中心、电工电子实验中心、基础力学实验中心）， 69 个独立的研究中心、研究院（室）， 73 个研究所。 2001 年以来，学校共获国家级教学、科技奖励 27 项，省部级科技奖励 151 项。